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基于SILACDimethyl标记的定量蛋白组分析

发布:2020/9/9 10:32:45

企业:北京百泰派克生物科技有限公司

来源:biotechpack

SILAC是细胞培养条件下稳定同位素标记技术(Stable Isotope Labeling By Amino Acids In Cell Culture, SILAC)的简称。SILAC实验流程是:细胞培养基中加入轻、中或重型稳定同位素标记的必需氨基酸赖氨酸(Lys)和精氨酸(Arg),在细胞生长过程中使新合成的蛋白会带上稳定同位素标签。等量混合各类型蛋白质,酶解后进行质谱分析。通过比较 质谱图中不带标记/带同位素标记质谱峰型的面积大小进行相对定量,同时二级谱图对肽段进行序列测定从而进行蛋白鉴定。与SILAC类似,二 Dimethyl标记也是一种同位素蛋白标记的方法。Dimethyl是一种小分子同位素化学标记物,通过化学标记的方法标记细胞裂解后的蛋白或多肽的N端或者赖氨酸的ε氨基基团,使蛋白/多肽标记上不同的Dimethyl标签。除了标记方法的差别外,SILAC/Dimethyl两种标记的质谱分析方法基本一致,而且具有相近的分析精度和广度,在定量蛋白组学分析研究中受到越来越广泛的运用。


百泰派克公司采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF质谱平台,Orbitrap Fusion质谱平台,Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC,推出基于SILAC/Dimethyl的定量蛋白组分析 技术包裹,您只需要将您的实验目的告诉我们并将您的细胞寄给我们,我们会负责项目后续所有事宜,包括细胞培养、细胞标记、蛋白提取、蛋白酶切、肽段分离、质谱分析、质谱原始数据分析、生物信息学分析。


关于样品


1.您只需使用干冰将冻存细胞寄给我们即可,同时保证细胞具有可以传代培养5次以上的能力;

2.如果您需要自己标记细胞并完成细胞的刺激等处理过程,您只需要将标记完成并且经过处理的细胞样品或者蛋白样品干冰寄给我们即可;对于每个样品,需要保证含有50-100ug蛋白。


总的来说,SILAC的重复性比Dimethyl稍高一些,因为不同的SILAC样品在蛋白酶切之前就已经混合在一起,而Dimethyl标记的是酶切后的多肽片段,受到体系稳定性影响更多,因此重复性稍逊于SILAC。但是Dimethyl作为一种 价廉的标记手段也得到越来越广泛的应用。


中/英文项目报告


在技术报告中,百泰派克会为您提供详细的中英文双语版技术报告,报告包括:


1. 实验步骤(中英文)

2. 相关的质谱参数(中英文)

3. 鉴定的磷酸化位点的详细信息

4. 质谱图片

5. 原始数据


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